Separation of Tocol–Derivatives by Elevated Temperature Normal–Phase Liquid Chromatography

Abstract

Kaedah baru bagi pemisahan lapan isomer vitamin E (α–, β–, γ–, δ–tokoferol, dan α–, β–, γ–, δ–tokotrienol) dan α–tokoferol asetat menggunakan kromatografi cecair prestasi tinggi fasa normal (NP–HPLC) pada suhu turus yang tinggi telah dibangunkan. Pemisahan itu telah dioptimumkan dengan mengubah komposisi pengelusi dan suhu turus. Kesemua isomer itu berjaya dipisahkan menggunakan NP–HPLC di atas turus amino dan silika. Dengan hanya meningkatkan suhu turus silika, pemisahan berkecekapan tinggi dan masa analisis yang singkat telah diperoleh tanpa kehilangan resolusi yang signifikan. Kaedah pemisahan yang dibangunkan ini adalah cepat, menunjukkan kebolehulangan yang baik, dan sesuai sebagai kaedah kuantitatif dalam analisis tokoferol dan tokotrienol. Kata kunci: HPLC suhu tinggi, tokoferol, tokotrienol, vitamin E A novel method for the separation of eight vitamin E isomers (α–, β–, γ–, δ–tocopherol, and α–, β–, γ–, δ–tocotrienol) and α–tocopherol acetate on normal phase high performance liquid chromatography (NP–HPLC) at elevated column temperature has been developed. The separation was optimized by varying the eluent composition and column temperature. All the isomers were successfully separated using NP–HPLC on amino and silica columns. By simply increasing the temperature for silica column, excellent separation efficiencies and shorter analysis times were achieved without significant loss in resolution. The developed separation method is rapid, shows excellent reproducibility, and suitable to be used as a quantitative method in analyzing tocopherols and tocotrienols. Key words: Elevated temperature HPLC, tocopherols, tocotrienols, vitamin E