A Potential Use Of Dehalogenase D (DEHD) From Rhizobium sp. For Industrial Process

Abstract

DehL dan DehD dari Rhizobium sp. yang di hasilkan secara pengekspresan gen di dalam E.coli telah ditulenkan menggunakan kolum pertukaran ion kromatografi. Pencirian telah dilakukan terhadap DehL dan DehD melalui analisis kinetik untuk menentuan nilai pemalar K_m, K_cat dan pemalar tetap. Analisis kinetik menunjukkan DehD dari Rhizobium sp. mempunyai nilai K_m yang lebih rendah (0.04mM dengan _D,L-2-CP) dan nilai K_cat (6.28saat^–1 bagi _D,L-2-CP) dan pemalar tetap (1.46 10⁵ M^–1sec^–1 bagi _D,L-2-CP) yang lebih tinggi berbanding dengan dehalogenase _D-spesifik dari pada organisma lain menunjukkan DehD dari Rhizobium sp. merupakan pemangkin yang lebih baik. _D-2-haloasid amat penting dalam industri bio-pemangkin berbanding dengan _L-2-haloasid, dan data kinetik DehD menjanjikan ia boleh diguna dalam proses industri sekiranya dimajukan. The Rhizobium sp. DehL and DehD were produced by heterologous expression of the cloned gene in E.coli and both proteins purified using anion-exchange column chromatography. DehL and DehD were characterised by kinetic analysis to determine their K_m, K_cat and the Specificity constant values. The kinetic analysis results showed that DehD from Rhizobium sp. has lower K_m value (0.04 mM with _D,L-2-CP) and higher K_cat (6.28 sec^–1 for _D,L-2-CP) and Specificity constants (1.46 10⁵ M^–1sec^–1 for _D,L-2-CP) compared to other _D-specific dehalogenases from different organism suggesting DehD enzyme from Rhizobium sp. is better catalysts. _D-2-haloacid dehalogenase is important for industrial biocatalysis compared to the _L-2-haloacid and the kinetic data of DehD hold promise for further development to be used in an industrial process.